色谱柱的特点和分类

3-1 柱的结构
　　1、堵棒（或导管）2、接头　3、接头　4、密封圈　5、螺帽　6、柱密封圈　7、柱管　8、柱填料　9　10、过滤片
　  3-2 柱的分类：
根据所有的担体材料分为三种：
　　a.硅胶型：机械强度高，易制成小颗粒，理论塔板数高。
　　b.聚全物型：在广泛的PH值范围内稳定
　　c.羟基磷灰石型：对蛋白质等生物高分子样品有特殊的选择性。
根据分离方式分类：
　　a.硅胶型
　　　1） 正相：SIL--磷脂、NH--糖、维生素E，CN--甾类激素。
　　　2） 反相：ODS（C18）、（C8 CN TMS Pheny1）低分子量化全物。
　　　3） 离子交换：
　　　　　WAX（弱碱阴离子交换）--核苷酸、蛋白质
　　　　　WCX（弱酸阳离子交换）--蛋白质
　　　　　SAX（强碱阴离子交换）--核苷酸
　　　　　SCX（强酸阳离子交换）--儿茶酚胶
　　　4）凝胶过滤：
　　　　　Diol--蛋白质 GF--蛋白质
　　b.聚合物型：
　　　1）反相：ODP--50--肽，蛋白质，低分化合物。
　　　2）离子交换：ISC--氨基酸，胍类化合物，ISA--糖，IC--无机离子，PA--蛋白质，ES--蛋白质。
　　　3）配位交换：SCR（磺化聚苯乙烯）--糖。
　　　4）离子排阻：SCR-101H 102H--有机酸
　　　5）凝胶过滤：ION--多糖 GS--水溶性分子
　　　6）凝胶渗透色谱（GPC）：GPD--合成分子、橡胶。
　　　7）羟基磷灰石型：HPC--蛋白质、核苷酸
按尺寸分类：
　　1.制备：30mm 50mm 内径，半制备：20mm内径。
　　2.分析：标准型柱：4_8mm内径。
　　　　　　快速色谱柱：3mm内径、5cm长、4.6mm内径。
　　　　　　小孔径柱：2.5mm内径，微孔径柱1mm内径。
3-3柱的技术指标
　　*耐压：不小于40Mpa。
　　*渗透性：反相--流动相甲醇1ml/min，压力3Mpa。
　　　　　　　正相--正乙烷1ml/min,压力3Mpa.
　　*柱效：理论塔板极数>3x103。
　　*对称柱：葸峰不对称因子AS在0.8~2.0范围内。
　　*外观：光洁、标牌、尺寸、填充剂、流动相方向、日期等。
ODS柱
　　ODS（C18）色谱柱是将十八烷基键合在担体的表面，然后填充的柱，在HPLC中应用广。在HPLC中反相色谱的引用占70%，其中极大部分 使用的是ODS（C18）。本公司所附的柱也是ODS（C18）柱，内径4.6mm,长度150mm。
一般反相色谱系统，流动相为极性溶剂，如水、甲醇、乙腈，非极性固定相，如十八烷基。反相系统简单，重复性好，柱子能长期稳 定工作，能完成分离、分析任务的60-80%，所以分析工作者使用得zui多的是反相柱。
柱的使用和维护
　　由于柱的质量直接影响到样品组分得分离情况，组分的定性，定量分析，所以在操作时必须十分注意。
　　通常柱子损坏表现为：柱压升高，柱效下降，保留值改变，峰形崎变等。
以反相为列，它要求填料处于甲醇或乙腈中，不使柱子干枯，并注意下列事项：
　　* 勿使柱子受较强振动
　　* 较长时间不用时，应在柱中充满甲醇，并把两头封死，尽量不使干枯。
　　* 当用水和甲醇（或乙腈）混合液体溶剂时，工作结束后必须用纯甲醇冲洗30分钟至1个小时，使柱子处于甲醇中，因水　　　易繁殖微生物， 使柱子堵塞，并降低柱效。
　　* 当使用KH2PO4等缓冲液时，盐的浓度宜低，否则盐容易析出，柱效降低，柱压升高，使用后　　　必须用水冲洗（ 绝不能用甲醇冲洗）使缓冲液全部溶于水排出，然后再用甲醇冲洗。
　　* 硅基固定相不宜在PH>8时使用，此时容易产生絮状物析出，堵塞柱子。
　　* 当流动相呈酸性时，使用后必须用水冲洗，因酸使柱效降低，后再用甲醇冲洗。
　　* 流动相经过过滤处理。
　　* 样品也经过过滤处理。
　　* 样品有时能复盖填料得活性点，使柱压升高，保留时间下降，防止方法是样品经过过滤。
　　* 样品组分的不可逆吸附，使柱压升高，柱效降低（通常易被吸附的有蛋白质、糖）防止方法是加保护柱和溶剂反冲，　　　zui常用的是四氢呋喃。
　　* 当流动相从A换到B时，A、B不相溶，必须选择一能同A、B互溶剂C，先换成C再把C换成B，zui常用的中间液是异丙醇。
　　* 由于长期使用，在较大的压力下，担体破裂而流失在柱前端形成一段空隙，使柱效下降，峰形畸变。维护方法：卸下　　　接头，用甲醇把填料调成糊状，填入柱内，同时将过滤片用超声波清洗机清洗一次。